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May 01, 2023

Manuel de sécurité des autoclaves

L'autoclave qui utilise de la vapeur saturée sous pression est l'un des plus

L'autoclave qui utilise de la vapeur saturée sous pression est l'une des méthodes les plus fiables disponibles en laboratoire pour l'inactivation de toutes les formes de vie microbienne. Pour assurer la sécurité et le contrôle de la qualité, tous les matériaux et objets présentant un risque biologique contaminés par des agents potentiellement infectieux doivent être décontaminés avant utilisation ou élimination. Ces articles comprennent, mais sans s'y limiter : les milieux de culture, les instruments chirurgicaux, l'équipement de laboratoire, la verrerie et les déchets biomédicaux, y compris les objets tranchants. La stérilisation à la vapeur n'est pas recommandée pour les substances anhydres, les matériaux inflammables, les équipements électriques, les matériaux radioactifs ou tout élément susceptible d'être endommagé lors du processus d'autoclavage.

Le stérilisateur à vapeur le plus courant dans les laboratoires est le type à déplacement par gravité. La vapeur saturée entre par le haut de la chambre par une vanne de contrôle de la pression de vapeur. Lorsque la vapeur entre, elle pousse l'air à travers un piège dans la conduite de vidange. Une fois que tout l'air est évacué, le piège se referme. La vapeur continue de remplir la chambre de l'autoclave jusqu'à ce qu'une température et une pression prédéfinies soient atteintes. Les conditions de fonctionnement courantes de l'autoclave sont de 121 oC et de 15 livres par pouce carré de pression manométrique (psig).

La procédure de stérilisation se compose de trois phases. Il s'agit du temps de chauffe de l'autoclave, du temps de contact et du temps de refroidissement. Une fois que la température est arrivée à l'équilibre, un minimum de vingt minutes de temps de contact pour toutes les surfaces qui nécessitent une stérilisation est nécessaire pour assurer une inactivation biologique complète. Habituellement, la section de temps de chauffage de la procédure de stérilisation est le temps accordé à la chambre de l'autoclave pour chauffer jusqu'à la température prescrite ; par conséquent, le temps d'exécution utilisé doit être suffisamment long pour que l'ensemble de l'emballage s'équilibre à 121 oC tout en donnant à la charge un temps de contact de vingt minutes. Les temps d'exécution totaux approximatifs pour les matériaux solides sont indiqués dans le tableau 1. Les liquides prendront encore plus de temps à stériliser. Une bonne approximation des durées de fonctionnement des liquides est de 1,5 à 2 fois le temps nécessaire pour stériliser le poids donné s'il s'agissait d'un matériau solide. N'oubliez pas que ces données concernent des éléments uniques. Pour les grosses charges, une règle empirique est que s'il y a un espace supérieur à six pouces entre chaque article, le temps d'exécution peut être réglé pour le poids de l'article le plus lourd ; cependant, si les articles sont distants de moins de six pouces, ils sont considérés comme n'en faisant qu'un. Par exemple, si un chercheur passe à l'autoclave deux sacs de déchets biomédicaux : l'un pèse six livres et l'autre pèse onze livres. Si l'autoclave est suffisamment grand pour que les sacs puissent être espacés de sept pouces, le temps de fonctionnement peut être réglé sur soixante minutes. Cependant, si les sacs sont distants de moins de six pouces, il n'y aura pas assez de place pour un mélange de vapeur adéquat, et la charge doit être considérée comme le total des deux sacs - dix-sept livres. D'après le tableau 1, on peut voir qu'un temps d'exécution de quatre-vingt-dix minutes serait nécessaire pour cette charge.

Tous les matériaux potentiellement infectieux doivent être autoclavés avant d'être lavés, stockés ou éliminés comme déchets biomédicaux. Le personnel qui utilise l'autoclave doit être formé pour comprendre l'emballage, le chargement, l'étiquetage, ainsi que les procédures de fonctionnement et d'urgence. Cette formation doit également être documentée par le chercheur principal responsable du laboratoire. Les autoclaves génèrent une chaleur et une pression élevées ; par conséquent, tous les utilisateurs doivent comprendre et respecter les risques associés. Manipulez toujours les objets chauds avec un gant épais conçu à cet effet. A la fin du cycle, laisser refroidir l'autoclave avant de l'ouvrir. Reculez ensuite et ouvrez doucement la porte pour laisser s'échapper l'excès de vapeur. Certains autoclaves plus anciens ont peu ou pas de protection thermique.

Des panneaux d'avertissement avertissant les utilisateurs de ces surfaces chaudes doivent être placés à côté de l'autoclave pour rappeler au personnel ce danger. Ne pas empiler ou stocker des matériaux combustibles tels que des récipients en carton ou en plastique, ou des liquides inflammables à côté de l'autoclave.

La plupart des autoclaves ont un système de verrouillage de sécurité qui empêche l'instrument de fonctionner si la porte n'est pas correctement fermée ; cependant, les mêmes unités plus anciennes peuvent ne pas avoir un tel mécanisme de sécurité intégré. Si l'autoclave qui dessert votre laboratoire ne dispose pas d'un système de verrouillage, des précautions particulières doivent être observées pour s'assurer que la porte est correctement scellée avant le début du processus. Si de la vapeur s'échappe autour de la porte pendant le processus de stérilisation, la porte n'a pas été scellée correctement. Dans ce cas, arrêtez le système de la manière la plus sûre possible. Laissez l'appareil refroidir et réinitialisez la porte. Veillez tout particulièrement à ce que la porte soit bien scellée et redémarrez le cycle. Si ce problème persiste, l'appareil doit être réparé par un technicien qualifié.

Les déchets biomédicaux doivent être étiquetés comme tels à l'aide du symbole universel de danger biologique et doivent, si possible, être stérilisés à la fin de chaque journée de travail. Ne laissez jamais de matériel non stérilisé à l'intérieur de l'autoclave ou assis dans la salle de l'autoclave pendant la nuit. Ne jamais stériliser à l'autoclave des matériaux contenant des agents toxiques, des produits chimiques volatils ou des radionucléides. Le Service de l'environnement, de la santé et de la sécurité doit être contacté si l'on exige la stérilisation de ces types de matériel.

Tous les déchets biomédicaux à autoclaver doivent d'abord être placés dans un sac autoclave approuvé et étiqueté. Les objets tranchants tels que les aiguilles et les scalpels doivent être placés dans un conteneur pour objets tranchants approuvé, étiqueté et strié avant la stérilisation. Ne placez pas de pipettes pointues ou de verre brisé dans des sacs. Ces déchets doivent être placés dans des boîtes ou des seaux pour être autoclavés ou être stérilisés à l'aide d'un agent stérilisant liquide tel que l'hypochlorite de sodium à 10 %. Les déchets biomédicaux qui doivent être stérilisés dans un autoclave doivent avoir un indicateur qui démontre que les déchets ont été autoclavés avant de pouvoir être éliminés. De nombreux sacs d'autoclave sont livrés avec un indicateur qui produit le mot "AUTOCLAVÉ" lorsque le cycle de stérilisation est terminé. Ces sacs sont disponibles gratuitement pour l'investigateur via EH&S. Les boîtes et les seaux devront être munis d'un indicateur avant d'être autoclavés et jetés dans la benne à ordures. Les déchets potentiellement infectieux doivent être étiquetés « BIOHAZARD » et avoir l'étiquette de danger biologique présente sur le conteneur. Lors de la stérilisation de matériaux non dangereux tels que les nécessités pour animaux de recherche, les milieux et l'équipement de laboratoire qui seront utilisés dans un environnement stérile, des conteneurs simples et non marqués seront adéquats.

Environ 50 ml à 100 ml d'eau doivent être placés dans le sac de l'autoclave avant le démarrage pour faciliter la production de vapeur dans le sac. Si cette eau est naturellement présente dans la charge, il n'est pas nécessaire d'ajouter de l'eau supplémentaire. Les sacs d'autoclave doivent être enveloppés pour éviter les déversements si le sac se renverse ; cependant, si le ruban est trop serré, la pression de la vapeur peut s'accumuler à l'intérieur du sac et provoquer sa rupture. Ne doublez pas les déchets du sac. Les sacs d'autoclave sont conçus pour être perméables à la vapeur, mais un double sac retardera le flux de vapeur à travers le sac. Ne remplissez pas trop les sacs ou l'autoclave, car cela pourrait interférer avec le processus de stérilisation en raison d'une mauvaise circulation de la vapeur. Il est préférable de ne pas placer les sacs directement dans l'autoclave. Ils doivent être placés sur des plateaux en acier inoxydable ou en polypropylène. Les plateaux en acier inoxydable conduisent la chaleur beaucoup plus efficacement que le polypropylène et améliorent donc le processus de stérilisation.

Ne remplissez pas le récipient à plus de 75 % de sa capacité lors de l'autoclavage de liquides. Cela garantira que le fluide a de la place pour se dilater lorsqu'il est chauffé. Étant donné que la stérilisation des liquides à la vapeur peut être problématique, il est préférable de stériliser les déchets liquides à l'aide d'un agent chimique si possible. Si l'enquêteur choisit d'utiliser de la vapeur pour stériliser le liquide, le récipient contenant le liquide doit être capable de résister aux conditions de l'autoclave. Du verre borosilicaté tel que le Kimax ou le Pyrex, ou des récipients en polypropylène peuvent être utilisés. Assurez-vous de desserrer les bouchons des récipients pour permettre l'accumulation de pression pendant le processus. Placez toujours la verrerie en vrac et les récipients de liquide à l'intérieur d'un récipient secondaire pendant le processus d'autoclavage. Lorsque des liquides sont retirés de l'autoclave, portez des gants épais résistants à la chaleur, des lunettes anti-éclaboussures et un tablier en caoutchouc. Le cycle d'évacuation de l'autoclave doit être réglé très lentement pour les charges liquides. Cela laisse le temps au liquide de refroidir en dessous de 100 ° C afin que le liquide ne bout pas lorsque la pression est réduite. Une fois le cycle terminé, ouvrez lentement la porte et reculez jusqu'à ce que la vapeur se soit dissipée.

Les paramètres du cycle de stérilisation dépendent de la quantité et du type de matériel. Les temps indiqués dans le tableau 1 sont de bonnes directives à suivre. Le temps de cycle doit être développé pour un scénario du pire cas. Les charges plus denses prendront plus de temps que les charges moins denses du même poids. La procédure de fonctionnement exacte pour chaque modèle d'autoclave et les différentes charges seront différentes ; par conséquent, l'utilisateur responsable doit rédiger une procédure opératoire standard (SOP) complète pour l'opération de stérilisation à la vapeur. Cette POS doit inclure la procédure de stérilisation pour chaque type de charge autoclavée.

Il est prudent de documenter chaque charge d'autoclave dans un journal d'autoclave. Ce journal doit inclure le type de charge (support, déchets, nécessités pour animaux, etc.), la quantité, le programme d'exécution, la date, l'heure et le nom de l'opérateur. Conservez des tableaux ou des bandes imprimées dans le journal de bord comme documentation du fonctionnement de l'autoclave.

Chaque unité d'autoclave doit avoir un entretien préventif, y compris des procédures de test de spores d'autoclave, et être placée sur un programme d'entretien préventif avec un technicien de réparation qualifié. Il doit être inspecté annuellement. Le technicien de service s'assurera que l'appareil fonctionne correctement et en toute sécurité. Tout problème doit être signalé directement à l'entrepreneur de maintenance afin que la situation puisse être corrigée dès que possible. L'entretien préventif de l'opérateur responsable comprend : le retrait et le nettoyage de la crépine de vidange, le cas échéant, une fois par semaine, et une inspection visuelle mensuelle des joints, des portes, des étagères et des parois de l'autoclave pour détecter l'accumulation ou l'usure des résidus. Tout problème ou détérioration doit être résolu dès que possible après qu'il a été constaté.

Un faux sentiment de sécurité peut prévaloir à moins qu'un programme de contrôle de la qualité ne soit mis en place dans chaque laboratoire utilisant un autoclave. Un indicateur visible doit être utilisé dans chaque charge de déchets biomédicaux stérilisés. Il est prudent d'inclure un indicateur, tel qu'un ruban d'autoclave, sur toutes les analyses d'autoclave. De plus, le comté de Washoe exige que tous les autoclaves soient testés avec un indicateur biologique et documentés mensuellement. Les résultats des tests documentés doivent être conservés pendant au moins un an. Les indicateurs biologiques utilisent des spores de Bacillus stearothermophilus résistantes à la chaleur comme contrôle pour tester une destruction efficace pendant le processus d'autoclavage. Les flacons de spores sont placés dans un endroit difficile dans un sac de déchets médicaux pendant une course. Une croissance négative démontre que l'autoclave fonctionne correctement. Si le testeur obtient une croissance positive, essayez à nouveau l'analyse avec un nouveau flacon. Une croissance positive constante indique un problème qui doit être réparé avant que l'autoclave puisse continuer à fonctionner.

Bien que l'autoclave soit un instrument efficace pour la stérilisation à la vapeur, il doit être entretenu correctement et tous les utilisateurs doivent être formés à l'utilisation appropriée et à la sensibilisation aux dangers lors de l'utilisation de l'autoclave. Si vous avez des questions sur la stérilisation, vous pouvez les communiquer à Chet Carpenter à [email protected] ou au (775) 784-4342.